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（一）、儀器設備1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；2）水浴鍋（二）、試劑1）pbs緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L。2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉3g，檸檬酸0.4g。3）0.5mol/LEDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10mmol/LNaOH調(diào)至pH...

三月二十日，來自中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、武漢菲沙基因信息有限公司(Frasergen)和加拿大西蒙佛雷澤大學的研究人員，在學術(shù)期刊《JournalofBioLogicalChemistry》發(fā)表學術(shù)論文，該研究檢測了iPSC生成及隨后基因校正過程中的基因組不穩(wěn)定性，指出重編程和基因打靶可能會產(chǎn)生大量但卻不同的基因組變化，因此，在iPSC誘導時及基因打靶之后，必須進行嚴格的基因組監(jiān)控和選擇。本文通訊作者是中科院生物醫(yī)藥與健康研究院研究員潘光錦博士，其2002年碩士畢業(yè)于...

關于293/293T細胞1、種屬都為人，不是鼠。2、來源：293細胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時表達SV40大T抗原，含有SV40復制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)?？梢詮椭啤Ｓ肅a3(PO4)2轉(zhuǎn)染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內(nèi)及細胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。3、形態(tài)為上皮細胞，能致瘤。4、染色體核型：亞三倍體人細胞系。染色體眾...

一、免疫組化技術(shù)的基本原理應用免疫學及組織化學原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學技術(shù)或免疫細胞化學技術(shù)。*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體(*抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體...

實驗原理：PCR擴增是模擬天然DNA復制過程，利用DNA聚合酶在體外（試管中）擴增一對引物之間特異性DNA片段的方法。其主要熱循環(huán)過程可分為三個步驟：（1）高溫變性（denature）：提供DNA復制的有效模板。（2）低溫退火（anneal）：引物與模板DNA復性，提供游離3’-OH端供DNA復制起始；（3）中溫延伸（extend）：依賴Mg2+，DNA聚合酶催化合成與模板互補的新的DNA分子。以上變性、退火、延伸三個過程組成一個循環(huán)周期；常循環(huán)25～40周期，經(jīng)過n輪循環(huán)后...

如今，幾乎每位研究人員都或多或少地知道生成誘導多能干細胞（iPSC）的配方。拿出體細胞，加入四種轉(zhuǎn)錄因子，等待幾個星期，搞定！不過，這其中到底發(fā)生了什么，卻是一個謎，人們想了解卻還未了解。顯然，這涉及到表觀遺傳學：從成纖維細胞轉(zhuǎn)變成iPSC，意味著那些過去關閉的基因必須再次啟動。其他基因，比如細胞分化的標志，則必須調(diào)低。西奈山醫(yī)院Lunenfeld-Tanenbaum研究所的資深科學家AndrasNagy談道：“每個細胞的基因組都幾乎是相同的。表觀基因組哪些基因表達，哪些蛋白...

G-protein-coupledreceptors(GPCRs)areactivatedbyawidevarietyofexternalstimuli.UponreceptoractivationtheG-proteinexchangesgdpforGTP,causingthedissociationoftheGTP-boundGalphaａndtheGbetagammasubunits,triggeringdiversesignalingcascades.Receptor...

雙PAG免疫金銀染色原理(一)染色流程：(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.(2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修復20min(98℃)，自然冷卻至室溫。(3)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.(4)1%EA(卵蛋白)15min,不洗。(5)適當稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37C孵育30min.(6)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×5min.(7)0.02mol/L(pH...

抗體藥物作為生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的關鍵驅(qū)動力，能安全有效地對癌癥、自身免疫病和感染性疾病等進行靶向治療，該藥物在2012年創(chuàng)下645.7億美元的銷售額，占生物制藥51.8%的份額。目前抗體藥物的市場需求量仍在攀升，預計到2015年，抗體藥物銷售額有望達980億美元左右。業(yè)內(nèi)人士認為，隨著疾病譜變化，抗體藥物的黃金時代已經(jīng)來到。單抗藥物的作用靶點很重要的一部分是行使細胞功能*的跨膜蛋白，包括多通道膜蛋白MMP(如g蛋白偶聯(lián)受體)和離子通道，這些蛋白也是診斷檢測的重要分析靶點。目前跨膜蛋...

一、目的通過氨基酸的分離，學習紙層析法的基本原理及操作方法。二、原理紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。層析溶劑由有機溶劑和水組成。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值(比移)來表示的：R=原點到層析點中心的距離原點到溶劑前沿的距離在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關。本實驗利用紙層析法分離氨基酸。三、器材1、層析缸①2、毛細管3、噴霧器4、培養(yǎng)皿5、層析濾紙(新華一號)四、試劑1、擴...