上海信帆生物提供骨組織切片TRAP染色實驗服務

上海信帆生物提供TRAP染色服務，檢測周期短，結(jié)果真實可靠，老師提供樣本即可（可提供脫鈣好的樣本或者由我司脫鈣均可），其余實驗中送到的試劑均由我司提供。

骨組織切片及trap染色實驗步驟
骨組織脫鈣：新鮮骨組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出置于EDTA脫鈣液內(nèi)脫鈣（不能用含酸的脫鈣液脫鈣），每3天換一次脫鈣液，至骨組織針扎可以順利通過為止。
取材：在通風櫥內(nèi)用手術刀將目的部位組織修平整，將修切好的組織和對應的標簽放于脫水盒內(nèi)。
脫水：將脫水盒放進吊籃里于脫水機內(nèi)依次梯度酒精進行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟III 1h。
包埋：將浸好蠟的組織于包埋機內(nèi)進行包埋。先將融化的蠟放入包埋框，待蠟凝固之前將組織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對應的標簽。于-20°凍臺冷卻，蠟凝固后將蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。
切片：將修整好的蠟塊置于石蠟切片機上切片，片厚4μm。 切片漂浮于攤片機40℃ 溫水上將組織展平，用載玻片將組織撈起，并放進60℃ 烘箱內(nèi)烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存?zhèn)溆谩?br />石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。
染液配制：A液：0.1mol/L醋酸緩沖液PH5.0：醋酸鈉1.3608g+蒸餾水100ml溶解，用冰醋酸調(diào)PH值到5.0。
B液：六偶氮副品紅

4%亞硝酸鈉：2g亞硝酸鈉+去離子水50ml

副品紅溶液：副品紅2.5g+去離子水50ml+濃鹽酸7.5ml，加熱至90°溶解后過濾，4°棕色瓶保存。臨用前4%亞硝酸鈉與副品紅溶液等比例混合。

C液：萘酚AS-BI磷酸酯20mg+N,N-二甲基甲酰胺1ml溶解。
孵育液配制：A液18ml+B液1ml+C液1ml混勻，用1M NaOH或1M鹽酸調(diào)pH至5.0，再加酒石酸鉀鈉0.282g，充分溶解過濾后備用即為TRAP孵育液。

8、 染色：切片置于TRAP孵育液內(nèi)37°孵育50min，鏡下觀察破骨細胞呈酒紅色為止。蒸餾水漂洗。

9、 蘇木素染細胞核：切片入Harris蘇木素染3-8min，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗，0.6%氨水返藍，流水沖洗。

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