上海信帆開(kāi)年特惠：6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶（6PGDH）試劑盒

測(cè)定意義： 磷酸戊糖途徑途徑中 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和 6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)依次 催化 NADP +生成 NADPH，與能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH 在逆 境生理中具有重要作用。

測(cè)定原理： 6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP +生成 NADPH，NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP + 在 260nm 處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定 340nm 吸光度增加速率，計(jì)算 6-PGDH 活性。

自備儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配置： 試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前配制，加入 5 mL 試劑一，混勻。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前配制，加入 5 mL 試劑一，混勻。

粗酶液提?。?稱(chēng)約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心 10min，取上清液， 待測(cè)。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 37℃（哺乳動(dòng)物樣本）或者 25℃（其他）水浴預(yù)熱 30 min 以上。

3. 空白管：取 1mL 石英比色皿，依次加入 100μL 蒸餾水，100μL 試劑二，700μL 試劑一， 100μL 試劑三，于 340nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化，第 0s 吸光值記為 A1，第 180s 吸光值 記為 A2。

4. 測(cè)定管：取 1mL 石英比色皿，依次加入 100μL 粗酶液，100μL 試劑二，700μL 試劑一， 100μL 試劑三，于 340nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化，第 10 s 吸光值記為 A3，第 190s 吸光 值記為 A4。

6PGDH 活性計(jì)算： 活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 的酶量為 1U（U/mg pr）。

6PGDH 酶活性(U/mg prot) = [(△A 測(cè)定管-△A 空白管)×V 反總÷ε÷d×10 9]÷(Cpr×V 樣)÷T = 535.9×(△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷Cpr △A 測(cè)定管：A4－A3；△A 空白管：A2－A1；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6220；d：比色皿光 徑，1 cm； V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.001 L；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，

需要另 外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液體積， 0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min。

注意事項(xiàng)：

（1）樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在提取當(dāng)日完成酶活性測(cè)定，粗酶液避免反 復(fù)凍融；

（2）試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，當(dāng)天未用完試劑保存在 4℃，可保存 1 周。

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