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GENOMIC大鼠S100B蛋白ELISA試劑盒介紹

更新時間:2014-07-28      瀏覽次數(shù):1220

  

GENOMIC試劑盒,全部采用完整德國生物試劑工藝,*的抗體生物試劑的具有高靈敏度,重復(fù)性好的ELISA試劑盒。自從問世以來,深受廣大科研用戶的好評。

    下面為大家介紹一下,GENOMIC品牌的大鼠S100B蛋白ELISA試劑盒:

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中S100B蛋白(S-100B)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本大鼠S100B蛋白(S-100B)水平。用純化的大鼠S100B蛋白(S-100B)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100B蛋白(S-100B),再與HRP標記的S100B蛋白(S-100B)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100B蛋白(S-100B)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品大鼠S100B蛋白(S-100B)濃度。 

試劑盒組成 

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(240 ng/L

0.5ml×1瓶

3

標包被

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120 ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

60 ng/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

30 ng/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

15 ng/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

7.5 ng/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

  1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
  6. 溫育:操作同3。
  7. 洗滌:操作同5。
  8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 

 

 

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