大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒基本信息

脂肪酸合成酶 fatty acid synthetase 乙酰CoA+7丙=酸CoA+14NADPH+14H+→棕櫚酸+7CO2+8CoA+14NADP++6H2O。催化上述反應(yīng)的酶稱(chēng)為脂肪酸合成酶，不過(guò)酵母酶的zui終產(chǎn)物是棕櫚酸CoA。如圖所示，在丙二酸基和乙?；s合時(shí)，在每次延長(zhǎng)C2單位的同時(shí)發(fā)生還原反應(yīng)，在這個(gè)復(fù)雜的反應(yīng)中，各有相應(yīng)的酶參與作用。而?；訡oA轉(zhuǎn)移到?；d體蛋白（ACP）上，以與此蛋白質(zhì)結(jié)合的形態(tài)進(jìn)行反應(yīng)。通過(guò)如圖所示的反應(yīng)反復(fù)進(jìn)行可生成棕櫚酸。在大腸桿菌中，各部分反應(yīng)的酶以及ACP是不結(jié)合在一起的，但在動(dòng)物和酵母中，各種酶是結(jié)合型，形成所謂多酶復(fù)合體。

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒的檢測(cè)技術(shù) 

雙抗體夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

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