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補(bǔ)體成分3重組蛋白定制服務(wù)前需要考慮的問題

更新時(shí)間:2017-08-11      瀏覽次數(shù):1027

補(bǔ)體成分3基本信息

中文名稱補(bǔ)體成分3

英文名稱C3

定  義 參與3條補(bǔ)體活化途徑的固有成分,為血漿含量zui高的補(bǔ)體成分。補(bǔ)體活化時(shí),C3可被C3轉(zhuǎn)化酶裂解為小片段C3a和大片段C3bC3a游離于液相,具有過敏毒素活性;C3b3條激活途徑C5轉(zhuǎn)化酶和旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶的關(guān)鍵組分,并可與免疫復(fù)合物、微生物、高分子物質(zhì)或細(xì)胞膜結(jié)合,從而介導(dǎo)調(diào)理作用和免疫黏附作用。

應(yīng)用學(xué)科 免疫學(xué)(一級(jí)學(xué)科),免疫系統(tǒng)(二級(jí)學(xué)科),免疫分子(三級(jí)學(xué)科)

補(bǔ)體成分3(C3)重組蛋白用法

PBS或其它。

補(bǔ)體成分3儲(chǔ)存條件

避免反復(fù)凍融。2-8°C不超過一個(gè)月,-80°C不超過12個(gè)月。

穩(wěn)定性

熱穩(wěn)定性以損失率顯示。

客戶在補(bǔ)體成分3(C3)重組蛋白定制服務(wù)前需要考慮的問題:

1,蛋白本身的特性:蛋白的可能功能,蛋白在細(xì)胞內(nèi)外的定位,蛋白的分子量大小,蛋白可能的結(jié)構(gòu)復(fù)雜度,蛋白的翻譯后修飾程度,蛋白是否是毒性蛋白分子。

2,下游實(shí)驗(yàn)對(duì)蛋白活性的要求:不同的研究目的對(duì)重組蛋白活性的需要不相同,部分實(shí)驗(yàn)需要蛋白功能結(jié)構(gòu)盡可能接近天然蛋白。

3,下游實(shí)驗(yàn)對(duì)蛋白純度的要求:蛋白的純度受蛋白表達(dá)量的影響,更高的純度會(huì)需要更多的純化流程,更長(zhǎng)的純化時(shí)間,有可能不利于較好地保留蛋白活性,所以蛋白的純度和蛋白的活性需要綜合平衡考慮;提高蛋白功能assay的特異性可以有效地減少非特異性雜蛋白的干擾。

4,下游實(shí)驗(yàn)對(duì)蛋白數(shù)量的需要:常規(guī)的蛋白功能學(xué)研究約需要10-100μg重組蛋白,特異性抗體制備約需要2-5mg重組蛋白,藥物assay和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可能需要更多數(shù)量蛋白。

5,選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng):不同的蛋白表達(dá)系統(tǒng)有不同的優(yōu)勢(shì),需要根據(jù)對(duì)問題1-4的充分考慮,選擇的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。

6,親和純化tag的保留:常規(guī)小的親和tag對(duì)補(bǔ)體成分3(C3)重組蛋白功能影響不太,可以保留,也減少去除tag過程對(duì)蛋白活性和蛋白得率的不利影響。

7,蛋白保存buffer是否有特別要求:根據(jù)蛋白特性和下游實(shí)驗(yàn)去除不適合放在蛋白保存

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