促紅細(xì)胞生成素 (EPO)檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介

促紅細(xì)胞生成素（英文名：Erythropoietin，簡(jiǎn)稱：EPO）是一種調(diào)控血紅細(xì)胞制造的糖蛋白質(zhì)激素，骨髓中血紅細(xì)胞前驅(qū)的細(xì)胞因子。人體的促紅細(xì)胞生成素由肝臟和腎合成分泌。嬰幼兒時(shí)期主要由肝臟合成，成年后主要由腎臟合成。促紅細(xì)胞生成素因?yàn)閷映霾桓F的禁藥事件而為公眾所知。注射人工合成的紅細(xì)胞生成激素刺激劑（ESA）可以提高運(yùn)動(dòng)員的成績(jī)。這種藥物與人體自身合成的促紅細(xì)胞生成素有微小的差別，比較容易被檢測(cè)出。

促紅細(xì)胞生成素 (EPO)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

雙抗體夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

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